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培訓內容

11月6日

9:00-11:30

理論講解：

一、基因編輯技術簡介（三代基因編輯工具）

1. ZFN 2.TALEN 3.CRISPR

二、CRISPR/Cas9基因編輯技術原理

1. CRISPR/Cas9發現歷史

2. CRISPR/Cas9作用機制解析

3. CRISPR/Cas9系統改造策略

13:00-17:00

理論講解：

一、sgRNA在線設計構建實戰演練(1.靶基因序列查找2.sgRNA在線設計合成)

二、CRISPR/Cas9轉染策略:

1.生物轉染（慢病毒、腺相關病毒等）

2.物理轉染 （電轉核酸/RNP、顯微注射、基因槍）

3.化學轉染 （脂質體、陽離子聚合物）

三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率檢測，脫靶檢測及解決策略

1、高保真Cas9（espCas9、Hifi-Cas9、Cluster1-Cas9）

11月7

9:00-11:30

理論講解：

一、CRISPR技術應用解析

1.基因敲除（單基因敲除、多基因敲除、大片段刪除、多靶點sgRNA載體構建策略）

2.基因敲入實戰演練（gRNA選擇、同源臂設計、導入，長片段導入策略/提高基因敲入效率策略，PITCh、HITI、CRISPR-轉座酶高效基因敲入系統）

3.CRISPR在轉錄調控中的應用（轉錄激活、轉錄抑制系統）

4.CRISPR靶基因標記定位

二、CRISPR案例解析

1.基因敲除在小鼠模型構建、植物、細胞、細菌、真菌等中的應用案例解析

2.基于CRISPR的全基因組基因敲除高通量篩選策略（文庫構建，選擇，流程優化等）

3.基于CRISPR的全基因組轉錄激活/抑制高通量篩選策略（文庫構建，選擇，流程優化等）

三、CRISPR/Cas9與基因沉默技術（siRNA、shRNA）系統比較。

13:00-17:00

理論講解：

一、單堿基基因編輯技術簡介及在基因治療中的應用

1.HF2-BE2 2.BE3系統 3.ABE系統4.單堿基基因編輯脫靶克服。

二、基因CRISPR的基因檢測系統

1、CRISPR-Cas12a系統介紹(DETECTR)

2、CRISPR-Cas13a系統介紹(SHERLOCK-多重病原菌檢測)

三、CRISPR/Cas9系統在腫瘤和遺傳病治療中應用解析

1、CRISPR結合免疫檢查點抑制劑治療腫瘤

2、單基因遺傳病治療（DMD、先天性黑朦、地中海貧血等）

3、CRISPR治療HIV-基因編輯嬰兒解析

4、CRISPR治療HIV炎性白血病病例解析

四、新一代無模板基因敲入系統解析

1、CRISPR Primer-editing 基因敲入原理及應用