三、培訓內容：

一）重組蛋白藥和發酵概述

1、重組蛋白藥的發展歷史及現狀

2、重組蛋白藥的表達系統

3、發酵工藝的基本概念

4、相關工藝設備和發酵工藝的操作模式

二）大腸桿菌重組蛋白發酵

1、菌株構建知識簡介

1.1 合適的宿主選擇：B系列與K系列

1.2 多樣的表達載體：pET, pQE, pBAD, pUC

1.3 不同的誘導方式：IPTG、溫度、阿拉伯糖

1.4 改進大腸桿菌蛋白表達的最新分子生物學技術（重點：分子生物學）

2、小試發酵工藝的開發

2.1 常用培養基的選擇

2.2 （培養條件（PH、溫度、溶氧、補料等）的優化）重點

2.3 高通量篩選技術與設備（重點：篩選）

4、大腸桿菌發酵工藝放大策略

4.1 發酵工藝放大帶來的問題解決(生產曲線與產量；培養基和補料優化等)

4.2 發酵工藝放大需遵循的一般原則，典型的大尺度發酵流程（重點：放大、原則）

4.3 大尺度發酵工藝參數的再確定與優化 （重點：工藝參數）

4.4 各階段工藝變更計劃

三）畢赤酵母重組蛋白發酵

1、畢赤酵母表達系統簡介

1.1 AOX1啟動子

1.2 分泌表達

1.3 密碼子優化

1.4 基因拷貝數

2、畢赤酵母發酵工藝開發方法及放大策略

2.1 常用培養基介紹，一般的補料分批發酵流程

2.2 發酵工藝參數（溫度、PH、溶氧、攪拌、OD、補料等）的影響及優化方法（重點：工藝參數、優化方法）

2.3 發酵工藝放大需重點解決的問題策略（重點）

3、發酵過程控制

3.1 發酵過程數據監測的新進展

3.2 發酵動力學模型的建立與應用（重點：動力學模型）

3.3 過程參數的控制與優化 （重點：過程參數）

3.4 放大考量要素

4、畢赤酵母高密度發酵的補料調控策略探討

四）QbD理念指導的發酵實驗設計方法（DOE）與實施

3.1 什么是QbD

3.2 不同生命周期階段的QbD

3.3 目標產品質量概況、關鍵質量屬性的概念與案例（重點：目標產品質量概況、關鍵質量屬性）

3.4 設計空間和控制策略 （重點）

3.5 什么是DOE

3.6 DOE的流程

3.7 實驗設計的基本原則與常用類型

3.8 穩健參數設計的設計方法與發酵實驗中的應用（重點：穩健參數設計的設計方法）

五）重組蛋白發酵難點問題與展望

1、重組蛋白發酵過程易發問題（重點：易發問題）

2、GMP體系下發酵工藝開發、各階段工藝變更計劃及生產

3、噬菌體污染的防治

4、下游工藝銜接

5、商業化生產模式下的思考(重點：IPAT、不同工藝配置、工廠的設計)